EMPREGO DA TERAPIA FOTODINÂMICA NA INATIVAÇÃO DE Candida albicans in vitro

Abstract

Espécies do gênero Candida fazem parte da microbiota comensal da cavidade oral. Entretanto, essas espécies merecem atenção especial devido às patologias que aparecem em pacientes imunossuprimidos, decorrentes do uso indiscriminado de antifúngicos, acarretando um aumento generalizado de cepas resistentes. A terapia fotodinâmica (TFD) está sendo investigada como uma ferramenta alternativa para o combate de microrganismos patogênicos. Esta terapia atua pela combinação de um agente fotossensível e uma fonte de luz visível que levam à produção de espécies reativas de oxigênio e/ou nitrogênio. O objetivo deste trabalho foi avaliar a ação da terapia fotodinâmica sobre Candida albicans em meio planctônico e em biofilme bem como a avaliação metabólica dessas células. Foi preparada uma suspensão de C. albicans (CEC 1291) contendo 106 UFC/mL. C. albicans foi semeada em Agar Sabouraud dextrose (SBA) e incubada a 37°C por 24 horas. Como fonte de luz foi usado um fotopolimerizador de resina odontológica de comprimento de onda 440nm, com potencia de 250 mW e com fluência de 50 J/cm2. O corante empregado foi o azul de metileno (concentração final de 0,1 mg/mL). Nos estudos realizados em meio planctônico foram avaliadas a viabilidade celular e a cinética de crescimento após o emprego da TFD. Os grupos experimentais foram delineados como segue: células submetidas à irradiação na presença de agente fotossensível (G-TFD), células submetidas somente a irradiação (G-luz), células submetidas somente ao tratamento com o agente fotossensível (G-Droga) e células não tratadas (L-D+). Para todos os experimentos foi estabelecido um inóculo de 106 UFC/mL, densidade óptica de 0,680 em 530 nm. As células planctônicas, após os respectivos tratamentos foram, a fim de se determinar a viabilidade celular, diluídas serialmente e posteriormente semeadas em SBA, incubadas por 24 horas a 37°C e contadas as UFC´s. Para a avaliação da cinética do crescimento e atividade metabólica foi realizada uma curva de crescimento avaliando-se a densidade celular e o pH por um período de 24 horas e analise calorimétrica. O ensaio de TFD com o azul de metileno inibiu o crescimento de C. albicans. O numero de UFC foi zero no grupo G-TFD. Já os grupos G-Droga, G-Controle, G-Luz apresentaram um crescimento significativo > 300 UFC. Já a curva de crescimento apresentou resultados positivos após a aplicação da TFD, pois no G-TFD mantiveram-se constante a absorbância e o pH durante as 24 horas indicando inibição do crescimento fúngico pela TFD. Já o grupo G-controle apresentou aumento da densidade celular e diminuição do pH, indicando o crescimento normal da C. albicans. A resposta energética detectada pela calorimetria demonstrou também uma diminuição de energia liberada no grupo G-TFD, diferente do grupo G-Controle. Os resultados apresentaram alta efetividade do azul de metileno aos ensaios realizados, foi possível provar que a C. albicans teve sua atividade metabólica inibida. Assim pode-se concluir que a TFD com azul de metileno é eficaz para o tratamento de C. albicans.